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使用双砷染料标记乙肝病毒使其在活细胞中显像

信息来源:p-l.com.cn   时间: 2014-01-09  浏览次数:263

    背景:
    在活细胞中使用绿荧光蛋白(GFP)标记病毒,使其显像,这项技术很好地帮助了人类对病毒的研究。但是GFP标记物是一种大分子片段插入物,并不适合空间结构有限的致密病毒粒子,乙肝病毒(HBV)就是这样一种病毒。
    
    目的:
    为了使得活体细胞中的HBV显像,我们使用荧光标记双砷剂染色的联合HBV,追踪在HBV感染细胞中其在胞质中的运动行为。
    方法:
    使用诱变的方法,我们将小尺寸四半胱氨酸(tetracysteine,TC)标记物(C-C-P-G-C-C)插入至HBV转染细胞表达的HBV核心蛋白不同细胞表位上,TC探针与双砷荧光染料结合。
    结果:
    通过共焦显微镜和透射电子显微镜(TEM)我们观察到TC标记的核蛋白被双砷剂染色,在细胞内发出特异性荧光,与核衣壳结合并形成荧光病毒体。重组荧光HBV保留了其感染性与野生型一致。此外,HBV颗粒在活体细胞中的运动轨迹揭示了胞内颗粒的运动是依靠微管。
    结论:
    据我们所知,本实验是首次使用双砷染料标记的荧光HBV病毒颗粒,并让其在活体细胞内的活动轨迹变得可视。这种荧光HBV可能成为一种活体成像方法的高效工具,为将来研究HBV生活周期精细过程以及病毒与宿主之间相互作用提供帮助。
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